¹ Е. Васкес, ² О.І. Шубравий
Московський державний університет ім. М.В. Ломоносова ¹, Московський зоопарк ²
Вирощування личинок морських риб в лабораторних умовах до теперішнього часу є складною проблемою. Як правило, личинки морських риб значно менше за розміром, ніж личинки прісноводних риб і мають більш тривалий період пелагического існування. Крім того, вони потребують більш спеціалізованої їжі.
Велика вимогливість личинок морських риб до якості води ще більш ускладнюють проблему. Проте, отримані певні успіхи у вирощуванні личинок деяких видів промислових риб, камбали калкана в Інституті біології південних морів, кефалі на біостанції Великий утреш і деяких видів чорноморських бичків. Любителям морського акваріума Д. Степанову і Д. Астахову вдалося освоїти методики розведення кількох видів риб клоунів [1] .
Складнощі в вирощуванні личинок були подолані наявністю великих морських акваріумів ємністю понад 1 т, необмеженою кількістю чистої морської води і можливістю годування личинок зібраним в море і сортувати за розміром планктоном. У лабораторіях, віддалених від моря, створити такі умови, що розвиваються личинок дуже складно.
Існують два способи вирощування личинок морських риб у віддалених від моря лабораторіях. Це використання великих акваріумів (іноді до 1000 літрів) і ємностей, підключених до систем регенерації води (Шубравий, 1983), використання невеликих акваріумів об'ємом 50 л за методикою "зелений водойму". В обох випадках застосування штучної морської води (Шубравий, 1983) дає кращі результати, так як вона практично стерильна і не містить шкідливих забруднень.
При першому способі виникає проблема захисту личинок від засмоктування їх в систему фільтрації, а також створення необхідної концентрації корму: захистити личинок від попадання в систему регенерації води може завіса з бульбашок повітря, створювана трубою, перфорованої через кожні кілька сантиметрів, покладеної по периметру акваріума. Труба підключається до повітряної магістралі (Haude і Ramsay, I972).
Хороші результати дає повільне обертання циліндричної сітки, встановленої на водозаборі. Швидкість потоку води через акваріум з личинками підібрана так, що за дві доби забезпечується повна зміна води. При будь-якому способі вирощування акваріум з личинками повинен бути з усіх боків закритий чорним папером або пластмасою і мати слабке верхнє освітлення, що робить корм більш помітним для личинок і оберігає їх від стресу (Marliave, I976).
При використанні методу "зелений водойма" ретельно вимитий суцільноскляні акваріум з оргскла заповнюють чистою морською водою. У воду додають необхідні поживні речовини з розрахунку середовища Гольдберга 1 мл / л 2 і 3 розчину і 2 мл / л 1 розчину (див. Далі).
Для стимуляції росту водоростей, акваріум яскраво висвітлюється - 2000 люкс.В акваріум вноситься культура водоростей. Зростаючі мікроводорості кондиционируют воду, виконуючи функцію біологічного фільтра, і утилізують метаболіти личинок, виділяючи в воду вітаміни і фітогормони, що стимулюють розвиток личинок. Акваріум з водоростями повинен бути задіяний за кілька днів до вилуплення личинок. Як регенераторів використовують такі мікроводорості: Dunaniela tertiolekta, Platimonas viridis, Monohrisis goldbani, Izohrisis sp, Phelodaktilum trikornutum.
Кращі результати виходять при використанні змішаних культур водоростей. При всіх способах вирощування личинок пересаджують в новий акваріум, оснащений системою регенерації, тільки після метаморфоза, коли вони здатні протистояти току води, що затягує їх в систему фільтрації.
Як об'єкт для відпрацювання методів вирощування личинок морських риб нами була обрана морська собачка Salaria (Blennius) pavo (рис. 12 кол. Вкл.). Цей вид широко поширений уздовж Чорноморського узбережжя Криму, невибагливий, добре живе в неволі і часто нереститься в акваріумі. Одного самця і двох самок S. pavo містили в 200-літровому морському акваріумі, обладнаному системою регенерації, при температурі води 23-25 ° С і рН 8-8,3, рівень нітрату становив 50-100 мг / л. Кладка ікри була виявлена в вересні 1986 року у великій раковині. Так як самець активно доглядав за ікрою, видаляючи незапліднені і не розвивається ікринки, кладку забрали через тиждень після нересту. Для штучної інкубації ікри раковина з кладкою була поміщена в циліндричний скляну посудину об'ємом 10 л. Для аерації струму води на висоті 1 см над кладкою була встановлена скляна трубка діаметром 4 мм, підключена до повітряного компресора. Вихід личинки з ікри спостерігався через 225-235 годин після нересту. Личинки, що виклюнулися відловлювали за допомогою сифона і пересаджували в личинковий культиватор. В якості останнього використовували суцільноскляні посудину об'ємом 10-15 літрів, освітлений згори двома люмінесцентними лампами по 20 ват. Стінки посудини із зовнішнього боку були пофарбовані в чорний колір. Невеликий не зафарбований ділянку залишили для спостережень. Струм води в посудині створювали за допомогою мішалки, з'єднаної з двигуном, що обертає її зі швидкістю 0,5-1,5 обороту в хвилину. На вісь двигуна одягнена пластмасова трубка, на протилежному кінці якої приклеєна під кутом 30 ° кругла пластмасова пластина діаметром 60 мм. При обертанні осі пластина робить колебательно-обертальний рух і тим самим забезпечує добре перемішування води. Пластина оберталася на відстані 6 см від дна. Перед приміщенням личинок в воду додавали культури мікроводоростей.
Концентрація водоростей підтримувалася на рівні 2х106 кл / мл шляхом щоденного додавання суміші культур. В якості стартового корму для личинок використовувалася коловратка Brachionas plicatilis.
Щільність коловертки в культиватор з личинками підтримували на рівні 10-20 екз. на мл. Через тиждень личинок перевели на годування наупліямі A rtemia salina. У місячному віці личинки пройшли метаморфоз і опустилися на дно. Ювенільні особини були поміщені в акваріум об'ємом 100 л з системою регенерації води. Минулих метаморфоз мальків годували мотилем. Під час вирощування личинок воду в культиватор щодня підмінювали на 20-30%: з дна видаляли екскременти і накопичився детрит. Виживання личинок до метаморфоза склала близько 50%.
годування личинок
Основні труднощі у вигодовуванні личинок морських риб полягають в підборі необхідних кормів. Як корм використовуються коловертки, копеподи, інфузорії, личинки двостулкових молюсків і усоногих рак. Застосування нетрадиційних кормів, таких, як варений курячий жовток, гомогенати молюсків і м'яса і т.д. не дає бажаних результатів, і сильно забруднюють воду.
В якості стартового корму для личинок солоновато-водну коловертку Brachionus plicftilis. Існує цілий ряд робіт з культивування цього виду (спектровая і ін., 1986).
Виживання при широкому діапазоні температур (14-36 ° С) і солоності (10-40 рр), слабка сприйнятливість до забруднень метаболітами робить цю коловертку незамінним кормом при лабораторному культивуванні.
Вирощувати коловертку можна в різних культиваторах. Хороші результати отримані нами при використанні спеціального культиватора. Він виготовлений з оргскла товщиною 6 мм. Подача повітря збоку забезпечує хорошу аерацію і перемішування культури. Центральний слив розташований в місці максимальної концентрації коловертки. Культиватор цілодобово висвітлюється 4 люмінесцентними лампами потужністю 20 ват для стимулювання зростання мікроводоростей. Культиватор термостатіруєтся за допомогою контактного термометра, електронного реле і нагрівача. Оптимальна температура для максимальної продуктивності -28-32оС.
Культиватор краще заповнювати свежеприготовленной морською водою, щоб уникнути занесення інфекції до личинок риб. Як корм для коловертки краще використовувати мікроводорості, тому що сама коловратка виступає в ролі "зручної упаковки" для мікроводоростей і від того, чим "наповнюють" коловертку і залежить успіх при вирощуванні личинок морських риб. Ми годували коловертку сумішшю водоростей Plathimonas viridis, Pavlovo luthari, Pheladactylum tricarnutum, Dunaliella tertiolekta.
Гарні результати виходять при годуванні коловертки сумішшю Pavlovo luthari з Izohrisis goldbani в співвідношенні 1: 1. Необхідно стежити, щоб в культиватор завжди була їжа для коловертки. Відсутність корми може привести до втрати культури. Для збереження культури ми використовували наступний спосіб. Інтенсивну культуру коловертки поміщали в літрову конічну колбу об'ємом 600 мл, туди ж додавали суміш мікроводоростей - 300 мл, і зберігали в холодильнику. Перші 1-2 тижні регулярно примушували і при необхідності додавали мікроводорості. Надалі при зменшенні щільності культури коловерток зберігали без перемішування при T = + 4 ° С до 1 року. Потрапивши в несприятливі умови (зниження температури в нашому випадку) коловертки переходять на статевий спосіб розмноження і дають міктіческіе яйця, які осідають на дно. Яйця зберігають здатність до розвитку протягом декількох років. При приміщенні в культиватор через 7-12 днів з яєць виводяться коловертки. Додавання суспензії мікроводоростей і цілодобове освітлення стимулює викл.
Основою успіху при вигодовуванні личинок морських риб є культивування одноклітинних водоростей різних видів в необхідній кількості. Зазвичай мікроводорості вирощують в колбах або бутлях встановлених біля вікна, або на спеціальних світлових стелажах (Smith WL, MH Chanley, 1975). При уявній простоті такої спосіб вирощування вимагає великих витрат праці, великих площ і вихід мікроводоростей для годування дуже низький, щільність суспензії мала.
Кращі результати виходять при використанні спеціально сконструйованих культиваторів трубчастого типу. Однак це, як правило, великі напівпромислові культиватори.
Для лабораторного культивування мікроводоростей найбільш зручним виявився суцільноскляні плоскопараллельний культиватор ємністю близько 2 літрів (рис. 1). Культиватор виготовлений з силікатного скла товщиною 3-4 мм, склеєної силіконовим клеєм. Конічний дно культиватора не дає можливості мікроводоростей осідати при барбатаже [2] і забезпечує добре перемішування суспензій. Барбатаж суспензії мікроводоростей забезпечується повітрям з 3% добавкою вуглекислого газу для отримання більш інтенсивного зростання. Повітря в культиватор подається через скляну микропипетку, встановлену в центрі конічного дна культиватора і приєднаний за допомогою силіконової трубки до магістралі повітря. Товщина шару суспензії мікроводоростей близько 10 мм є оптимальною для повного використання світлового потоку освітлювальних ламп. Для термостатирования використовується касета, склеєна з скла товщиною 5 мм, в якій встановлено 5 культиваторів мікроводоростей і змійовик охолодження з мідної трубки діаметром 10 мм. Касета попередньо заливається дистильованою водою з добавкою мідного купоросу для запобігання розвитку в ній мікроводоростей. У змійовик охолодження через електромагнітний клапан подається водопровідна вода. Датчиком температури є контактний термометр, який через електронне реле управляє електромагнітним клапаном подачі води. Як освітлювача використовуються 2 лампи типу ДРІ-400 або ДнАТ-400 з пускорегулюючим пристроєм, змонтованим на окремій рамі зі скляними параболічними відбивачами. Відсуваючи або наближаючи раму з лампами від культиватора, можна змінювати інтенсивність світлового потоку. Система подачі повітря складається з повітряного компресора, балона з вуглекислим газом і редуктора, двох ротаметрів, що вимірюють швидкість подачі повітря і вуглекислоти і системи шлангів з регулюючими кранами.
Перед роботою культиватори ретельно промивають і заповнюють стерильною морською водою. Для стерилізації морську воду, взяту з акваріума, пропускають через міліпоровий фільтр. Кращі результати виходять при температурній стерилізації шляхом триразового нагріву до 80 ° С. У воду додають середу Гольдберга (розчин I: KNO3 10,1г на 100 мл H2O distill .; розчин II: Na2HPO4 1,42г на 100 мл H2O; розчин III: FeCl3 * 6H2O 27,03 мг; MnCl2 * 4H2o 19,78 мг ; CoCl2 * 6H2O 23,79 мг на 100 мл H2O; на 1 літр морської води вносять розчини: I - 2 мл; II - 05 мл; III - 1 мл) і вносять мікроводорості. Інтенсивність світла при запуску культиватора повинна бути порядку (5-7) х 103 люкс. У міру наростання щільності культури інтенсивність освітлення збільшують до (20-50) x I03 люкс. Інтенсивність барботажа підбирають таким чином, щоб суспензія мікроводоростей НЕ вихлюпувалася з культиватора. При припинення росту культури необхідно замінити 25-30% суспензії свіжої середовищем з додаванням подвійної середовища Гольдберга. Наступну підміну зробити потрійний середовищем і надалі підмінювати потрійний середовищем.
Для автоматизації процесу вирощування мікроводоростей і отримання можливості визначення оптимальних значень рН нами був виготовлений культиватор рН-стат. У ньому був реалізований ефект збільшення рН середовища в міру зростання водоростей. Культиватор рН-стат (рис. 2) складається з реактора, забезпеченого патрубком переливу. У реакторі розташовані змійовик охолодження з нержавіючої труби діаметром 8 мм, електроди рН метра, контактний термометр, магнітна мішалка, освітлювача, що складається з лампи типу ДРІ 400 або ДКАТ400 з пускорегулюючим пристроєм і скляного параболічного відбивача забезпечує світловий потік до 60x1000 люкс.
Система рН стабілізації складається з рН-метра (рН 340) з блоком датчика, автотітратора БAT 15, електромагнітного клапана і побутового сифона.
Система термостатування складається з контактного термометра електронного реле і електромагнітного клапана.
Культиватор працює наступним чином: у міру зростання мікроводоростей в реакторі рН середовища починає збільшуватися від 8 до 9,5-10 рН. На автотітраторе виставляється необхідне значення рН. При досягненні рН середовища цього значення, автотітратор включає на короткий час електромагнітне реле, яке, в свою чергу, включає електромагнітний клапан. Порція газованої води з сифона надходить через клапан в реактор і знижує рН суспензії мікроводоростей, розбавляє її і постачає вуглекислим газом. Надлишок суспензії зливається в приймач або в культиватор коловертки, що і дозволяє автоматизувати процес годування коловерток.
Описаним вище способом було отримано розведення від інших видів Чорноморських собачок роду Salaria (Blennius) - S. sphynx, S. zvonimiri, S. tentacularis.
Мал. 1. Культиватор мікроводоростей лабораторний
Мал. 2. Культиватор мікроводоростей рН-стат
[1] Дивіться серію публікацій Д.А. Астахова, С.Ю. Попонова і В.Р. Попонова в збірниках «Наукові дослідження в зоологічних парках» (прим. Ред.).
[2] Барбатаж - пропускання бульбашок повітря через товщу води (прим. Авт.).
назад до змісту >>